> Novice > Novice iz industrije

Kakšne so funkcije kompleta ELISA?

2022-12-23

Komplet ELISA temelji na trdni fazi antigena ali protitelesa in označevanju antigena ali protitelesa z encimi. Antigen ali protitelo, vezano na površino trdnega nosilca, še vedno ohranja svojo imunološko aktivnost, encimsko označeni antigen ali protitelo pa ohranja tako svojo imunološko aktivnost kot encimsko aktivnost. V času določanja preskušani vzorec (v katerem se meri protitelo ali antigen) reagira z antigenom ali protitelesom na površini trdnega nosilca. Kompleks antigen-protitelo, ki nastane na trdnem nosilcu, se z izpiranjem loči od drugih snovi v tekočini.

Dodani so z encimi označeni antigeni ali protitelesa, ki se z reakcijo prav tako vežejo na trdni nosilec. V tem času je količina encima v trdni fazi sorazmerna s količino snovi v vzorcu. Po dodajanju substrata encimske reakcije, substrat katalizira encim, da postane obarvan produkt. Količina produkta je neposredno povezana s količino testirane snovi v vzorcu, zato je glede na globino barve mogoče izvesti kvalitativno ali kvantitativno analizo.

Visoka katalitična učinkovitost encimov posredno poveča rezultate imunskega odziva, zaradi česar je test zelo občutljiv. ELISA se lahko uporablja za določanje antigenov, lahko pa tudi za določanje protiteles.

Osnovna načela kompleta ELISA
Uporablja specifično reakcijo antigena in protitelesa za povezavo predmeta z encimom, nato pa ustvari barvno reakcijo med encimom in substratom za kvantitativno določitev. Predmet merjenja je lahko protitelo ali antigen.

Pri tej metodi določanja so potrebni trije reagenti:
â Antigen ali protitelo v trdni fazi (imunski adsorbent)
â¡ Encimsko označen antigen ali protitelo (marker)
â¢ substrat za encimsko delovanje (sredstvo za razvijanje barve)

Pri meritvi se antigen (protitelo) najprej veže na trdni nosilec, vendar še vedno ohrani svojo imunsko aktivnost, nato pa se doda konjugat (marker) protitelesa (antigena) in encima, ki še vedno ohrani prvotno imunsko aktivnost in encim. dejavnost. Ko konjugat reagira z antigenom (protitelesom) na trdnem nosilcu, se doda ustrezen substrat encima. To je katalitična hidroliza ali REDOX reakcija in barva.

Odtenek barve, ki ga proizvaja, je sorazmeren s količino antigena (protitelesa), ki ga je treba izmeriti. Ta obarvani produkt je mogoče opazovati s prostim očesom, optičnim mikroskopom, elektronskim mikroskopom, meriti ga je mogoče tudi s spektrofotometrom (instrument za označevanje encimov). Metoda je preprosta, priročna, hitra in specifična.

Prejšnja:Cotaus vas pričakuje na 2023EBC!

Naslednji:Zakaj celična kultura najprej lizira rdeče krvne celice?